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BD全血RNA管762165正確的使用方法

發布時間:2022-01-18      點擊次數:24
  BD全血RNA管762165使用方法:
  1.將0.2-1.5mL新鮮或解凍后的抗凝全血加入到1.5mL塑料離心管中。
  2.12,000rpm室溫離心3分鐘,棄上清(血漿)。如果此時血液細胞沉淀體積大于0.2mL,則需要減少血液的使用量,具體減少量需根據具體情況決定,因為各個個體(尤其是患者)血液中白細胞數目差別很大。
  3.將1mL溶液A加入到血液細胞沉淀中,用移液槍吹打沉淀使細胞裂解。
  4.將0.3mL的溶液B加入到離心管中,劇烈震蕩30秒。
  5.和0.2mL氯仿加入到離心管中,劇烈震蕩30秒。
  6.12,000rpm室溫離心3-5分鐘,將上清液(為無色或淺紅色,約0.5-0.9mL)轉移到另一干凈離心管中。為防止污染,建議留100uL左右的上清液。下層有機相一般呈深紅色,中間層為白色,含有DNA,蛋白質和其他細胞破碎物,避免觸及或吸取。
  7.在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自備氯仿,用手上下顛倒或振蕩器振蕩30秒混勻,此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
  8.室溫12,000rpm離心3分鐘,兩相間將有白色膜狀物(蛋白質)形成。
  9.將上清液(約1mL)轉移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中,避免觸及或吸取有機相及其上面的白色膜狀物。
  10.在上清液中加入0.5倍體積的溶液D,用手上下顛倒或振蕩器振蕩30秒混勻。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
  BD全血RNA管762165具有下列特點:
  1.比血液RNAOUT更加簡單快捷,直接使用新鮮的或冷凍的抗凝全血樣品,不需裂解紅細胞等任何預處理步驟,整個提取過程只需要十分鐘左右,可以全在室溫下進行。
  2.產量和純度更高,OD260/280均在2.0左右,產率一般為2-5ug/mL人血。
  3.每次微量提取的樣品處理量可以達到1.5mL,高于進口的同類產品。
  4.與常用的抗凝劑(包括肝素,EDTA,檸檬酸鈉,草酸鈉)兼容,得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern雜交等研究。
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