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淋巴細胞的采集、培養心得技巧-BD肝素鈉抗凝采血管

發布時間:2021-11-11      點擊次數:281

第一就是要稀釋。我們要留血漿(肝素鈉抗凝的采血管采的血,5~6ml),所以分離、取出血漿后加入和紅細胞等體積的生理鹽水,一般3ml左右,混勻。

第二,分離液不在乎體積有多少,主要是高度,如果離心管很粗的話(呵呵,挺吃虧的),就要多加一些,細一點的離心管就可以少加一些,一般高度要超過3cm。

第三,看你要分離的血是什么來源的,成人外周血比較好分,臍血和胎盤血不好分。當然,發生溶血和凝血的話就更難分了。

第四,血的保存很重要,采血后不要放到4度冰箱(當然更不能凍啦),常溫,避光即可。從采血到分離不要超過12個小時,不然效果也不好。

第五,就是離心的速度和時間。不同的離心機,肯定轉速不一樣的,我們實驗室一般用水平離心機2500轉,20分鐘,基本上沒有紅細胞了,淋巴細胞也很多。這一條要自己多試試。

第六,淋巴細胞分離液的保存不必放在4度,常溫即可,無論是否開封了的。我們試過,分離液一放到4度后,無論復溫的效果如何,分離的效果都沒以前好。

1.用0.85%生理鹽水對倍稀釋抗凝血液標本。

2.取淋巴細胞分離液3-4ml于干凈試管中。

3.往淋巴細胞分離液上層緩緩加入2倍于分離液體積的稀釋外周血量。

4.2000-2500RPM轉速離心15分鐘。

5.用吸管吸取中層白色渾濁液于eppendorf管-20℃保存待用。

注意事項:

1、取血的質量很重要,分離界面清楚的總是血樣質量好的(實驗室人自己獻的),我們用Hanks對倍稀釋!分離液一般是稀釋血量的1/2!

2、離心時間很有關系各實驗室離心機不同,自己摸索一下就好了!

3、破碎紅細胞我們用雙蒸水少于一分鐘。

4、試管的干凈程度也有關系的。


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