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不同實驗中 transwell 小室的選擇和使用

發布時間:2021-11-02      點擊次數:344

Transwell 小室在細胞實驗中很常用,共培養實驗、趨化實驗、細胞遷移、細胞侵襲以及藥物轉運實驗都會用到,但小室的規格有很多種,不同的實驗需要用到的小室規格也不同。

根據 transwell 板的不同,transwell 小室可以分為 6 孔板小室、12 孔板小室和 24 孔板小室以及和 transwell 皿配套的 75 mm 直徑的小室;根據孔徑的不同,從小孔徑到大孔徑又分為 0.4μm 規格、3μm 規格、5μm 規格、8μm 規格,不同實驗對小室孔徑的要求也不一樣。


小于 3μm 孔徑的小室,細胞不會遷移通過,研究不涉及細胞運動能力,不需要細胞穿過聚碳酸酯膜,應該選擇 3μm 以下的孔徑。例如共培養實驗和 caco-2 細胞轉運模型實驗。


共培養實驗:常用 0.4、34μm,將細胞 A 種于上室,細胞 B 種于下室,可以研究細胞 B 分泌或代謝產生的物質對細胞 A 的影響。


caco-2 細胞轉運模型:選用 0.44μm 膜,將 Caco-2 細胞以約 l×10 個/mL,每孔 0.5 mL 的密度接種在 Transwell 內培養 21d 左右,前 1 周隔天換液,1 周后每天換液。在模型 建立的同時對其跨膜電阻值及堿性磷酸酶活性進行監測來判斷模型是否達到轉運實驗要求。


涉及到細胞遷移的實驗:要用 5.0、8.0、12.0μm 的小室,這樣上室細胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室,計數進入下室的細胞量可反映細胞的趨化能力、遷移能力和侵襲能力。


趨化性實驗:細胞 B 對細胞 A 的趨化作用,將細胞 A 種于上室,細胞 B 種于下室,可以研究細胞 B 分泌或代謝產生的物質對細胞 A 的趨化作用;趨化因子對細胞的趨化作用,將細胞種于上室,下室加入某種趨化因子,可研究該趨化因子對細胞的趨化作用。


細胞遷移實驗:常用 8.0、12.0μm 膜,上室種細胞,下室加入 FBS 或某些特定的趨化因子,細胞會向營養成分高的下室跑,計數進入下室的細胞量可反映細胞的遷移能力。


細胞侵襲實驗:常用 8.0、12.0μm 膜,原理與細胞遷移實驗類似。上室種細胞,下室加入 FBS 或某些特定的趨化因子,細胞會向營養成分高的下室跑,但與細胞遷移實驗不同的是,聚碳酸酯膜上室側鋪上一層基質膠,用以模仿體內細胞外基質,細胞欲進入下室,先要分泌基質金屬蛋白酶(MMPs)將基質膠降解,方可通過聚碳酸酯膜。計數進入下室的細胞量可反映細胞的侵襲能力


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